一、基因信息

Dcaf8為小鼠的DDB1 and CUL4 associated factor 8基因，Ensembl version數據庫號為ENSMUSG00000026554.15。

1.1 Targeting Strategy

濟世金編運用專業技術知識、經驗，根據客戶的具體要求在Dcaf8的第4、10外顯子上設計的sgRNAs（如圖1），并將這些sgRNAs和Cas9 mRNA顯微注射到小鼠受精卵內，最后產生Dcaf8基因敲除小鼠。

圖1.

1.2 技術路線：

針對Dcaf8基因，設計并克隆sgRNA表達載體；體外轉錄Cas9 mRNA和sgRNA；受精卵注射，移植。注射用的受精卵為C57BL/6N背景；通過PCR和測序對出生的小鼠進行基因鑒定，得到F0代敲除小鼠。

二、基因型鑒定報告

2.1引物信息：

Primer 

F: TTCCACTTAGAAGTTCCCCCAG

R: CACGGGAAACAGGCCAGATA

PCR鑒定策略（圖2）：野生型（wt）產物理論長度約15.8k bp。

圖2.

2.2 PCR反應體系

2.3 PCR反應條件（touch down）

2.4 電泳圖

圖3：M：DNA Marker （自下而上：100bp, 200bp, 500bp, 750bp,1000bp,2000bp）1-6：鼠尾DNA。+：基因敲除陽性鼠。

2.5 陽性小鼠PCR產物測序報告

1#陽性鼠

4#陽性鼠

6#陽性鼠

（詳情附件中）

三、 分析與結論

通過PCR及其產物測序的方法鑒定小鼠基因型，本項目共產生3只Dcaf8基因敲除陽性鼠（1#，4#，6#）。